草莓镶脉病毒ORFⅡ基因的克隆、原核表达与抗血清制备

• 作者: 丁菲 李祥宇 杨友志 江彤 蒋磊 谢朝阳 邓竹根
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 草莓镶脉病毒 ORFⅡ基因 克隆 原核表达 多抗血清
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 病原学
• 页码范围: 20-26
• 页数: 7页
• 分类号: S661.9|S432.41
• 字数: 3693字
• 语种: 中文

摘要

用CTAB法从感染草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的草莓叶片中提取总DNA,设计特异性引物扩增SVBV中国分离物ORFⅡ基因,克隆并测序.结果表明,SVBV中国分离物ORFⅡ基因全长486 nts,编码161个氨基酸.将其与SVBV美国分离物以及花椰菜花叶病毒属其他成员的ORFⅡ基因相比较,结果表明,SVBV中国分离物ORFⅡ基因与SVBV美国分离物的核苷酸序列相似性最高,达91.2％.将SVBV ORFⅡ基因插入原核表达载体pET32a(+),重组质粒pET-ORFⅡ转化大肠杆菌BL21(DE3).经IPTG诱导及Ni2+-NTA亲和柱纯化,获得分子质量约为38 kDa的融合蛋白.以此纯化的融合蛋白为抗原免疫家兔,可以制备出高效价的抗血清.Western blot分析表明,制备的抗血清能与重组融合蛋白发生特异性反应.利用抗血清进行ELISA测定,能够检测出感病草莓植株病汁液中SVBV ORFⅡ基因表达的蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	江彤	安徽农业大学植物保护学院	62	201	6.0	10.0
2	邓竹根	安徽农业大学植物保护学院	3	8	2.0	2.0
3	丁菲		3	8	2.0	2.0
4	蒋磊	安徽农业大学植物保护学院	9	27	4.0	5.0
5	谢朝阳	安徽农业大学植物保护学院	3	9	2.0	3.0
6	李祥宇	安徽农业大学植物保护学院	5	19	3.0	4.0
7	杨友志	安徽农业大学植物保护学院	1	4	1.0	1.0