CYP3A4高表达肝细胞株建立及其对三氯乙烯毒性的影响

• 作者: 何晓阳 张然 徐新云 毛侃琅 毛吉炎 秦逍云 谢杏
• 来源期刊: 中国药理学与毒理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝细胞 细胞色素P-450 CYP3A4 慢病毒感染 三氯乙烯
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 848-853
• 页数: 6页
• 分类号: R994.3
• 字数: 4340字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3867/j.issn.1000-3002.2013.05.014

摘要

目的 建立CYP3A4高表达肝细胞株并观察其对三氯乙烯毒性的影响.方法 PCR扩增CYP3A4基因并将其克隆到慢病毒高表达载体中,将已经构建的慢病毒载体进行转染后,收集病毒上清,感染正常L02肝细胞.用嘌罗霉素进行筛选得到CYP3A4高表达肝细胞株,通过荧光定量PCR和Western蛋白质印迹法鉴定细胞株.用三氯乙烯0,0.25,0.5,1.0,2.0和4.0 mmol· L-1对正常肝肝细胞和CYP3A4高表达肝细胞进行染毒12h,实时定量PCR检测凋亡基因bcl-2,胱天蛋白酶3,胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9以及癌基因c-fos,c-myc,K-ras和p53的表达.结果 测序证明重组慢病毒高表达载体CYP3A4基因序列正确,荧光定量PCR检测CYP3A4高表达肝细胞株比正常肝细胞CYP3A4基因表达提高94倍. Western蛋白质印迹结果显示,CYP3A4高表达肝细胞株CYP3A4蛋白表达水平是正常肝细胞的2.36倍.CYP3A4高表达肝细胞bcl-2 mRNA表达水平随三氯乙烯浓度增加呈下降趋势,与正常细胞相比,三氯乙烯0.25和0.5 mmol·L-1使CYP3A4高表达肝细胞中的bcl-2 mRNA明显升高(P＜0.01);三氯乙烯0.5,1.0,2.0和4.0 mmol· L-1处理使CYP3A4高表达肝细胞组的凋亡基因胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9的mRNA表达水平明显升高(P＜0.05);三氯乙烯0.5,1.0,2.0和4.0 mmol·L-1处理的CYP3A4高表达肝细胞c-fos、c-myc和k-ras基因的表达显著升高(P＜0.01),p53表达水平明显下降(P＜0.01).结论 三氯乙烯对CYP3A4高表达肝细胞株中的凋亡基因和癌基因表达具有明显促进作用,说明CYP3A4是三氯乙烯在体内代谢的重要因素.