CXCR4基因shRNA表达质粒的构建及筛选鉴定

• 作者: 国春龙 宋新灵 王晓婓 胡志洪
• 来源期刊: 中国老年学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CXC趋化因子受体4 RNA干扰 U251细胞
• 年，卷（期）: 2013,（17）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 4192-4194
• 页数: 3页
• 分类号: R739.4
• 字数: 2542字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-9202.2013.17.042

摘要

目的 构建编码CXCR4mRNA的短发卡样RNA(shRNA)表达质粒用以筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体.方法 根据GenBank中登录的CXCR4基因的核苷酸序列,应用shRNA设计软件设计并合成4条短发卡shRNA的oligo DNA,构建shRNA重组质粒.采用酶切电泳和测序方法进行鉴定.将鉴定后的CXCR4基因shRNA重组质粒经脂质体介导转染胶质瘤U251细胞,24 h后经RT-PCR筛选有效的shRNA重组质粒.结果 构建的质粒表达载体PCR鉴定均可扩增出目的条带,DNA测序结果与理论序列完全一致.RT-PCR检测显示,转染pG-PU6/GFP/Rac 1-421的U251细胞CXCR4基因mRNA的转录水平下降.结论 成功构建CXCR4基因shRNA表达质粒,并筛选出效果最为明显的shRNA质粒表达载体为pGPU6/GFP/Rac1-421.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋新灵		14	52	5.0	6.0
2	王晓婓		2	56	1.0	2.0
3	国春龙		4	8	1.0	2.0
4	胡志洪		1	0	0.0	0.0