“细菌型”pepc2基因反向表达载体构建及在莱茵衣藻中的表达

• 作者: 何培民 施定基 田琪琳 米华玲 贾晓会 黄希文
• 来源期刊: 上海海洋大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 莱茵衣藻 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 qPCR 反向载体技术 生物柴油
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 水产生物技术
• 页码范围: 665-671
• 分类号: Q785
• 语种: 中文

摘要

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPC,EC 4.1.1.31)在植物碳代谢中处于代谢纽的关键位置,是调节细胞蛋白质和脂肪酸含量的关键酶,通过抑制pepc基因的表达,可以提高细胞的含油率.通过克隆莱茵衣藻“细菌型”pepc2基因的部分序列(简称Crpepc2)和莱茵衣藻融合启动子Hsp70A-RBCS2(简称HR),将HR和Crpepc2片段插入pSP124s中,获得Crpepc2反向表达的莱茵衣藻高效表达载体pSP124s-HR-reve-Crpepc2.利用基因枪将pSP24s和pSP124s-HR-reve-Crpepc2分别转入莱茵衣藻cc-503藻株,得到空质粒型和反向型突变藻株.利用qPCR检测莱茵衣藻野生型、空质粒型和反向型藻株“细菌型”pepc2基因的相对表达量,结果表明空质粒的导入对莱茵衣藻pepc2基因的相对表达量影响很小,为野生型的92.95％;而反向型pepc2基因的导入明显降低了莱茵衣藻pepc2基因的相对表达量,仅为野生型的2.94％.该结果一方面说明我们建立了利用qPCR快速检测莱茵衣藻pepc2基因相对表达量的方法,另一方面也证明利用Crpepc2反向表达的方法(即“反向载体技术”)可以有效的抑制莱茵衣藻pepc2基因的表达,为进一步筛选稳定的含油量高的藻株奠定了良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何培民	上海海洋大学水产与生命学院	140	911	16.0	21.0
2	施定基	上海海洋大学水产与生命学院	66	1027	18.0	28.0
4	米华玲	中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所	13	85	5.0	9.0
5	田琪琳	上海海洋大学水产与生命学院	4	27	3.0	4.0
8	贾晓会	上海海洋大学水产与生命学院	6	28	3.0	5.0
9	黄希文	上海海洋大学水产与生命学院	2	13	2.0	2.0