大鼠4-1BB基因shRNA表达质粒的构建、鉴定和筛选

• 作者: 于生才 侍阳 周晓俊 宋庆伟 殷骏 钱海鑫
• 来源期刊: 徐州医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 4-1BB(CD137) 小干扰RNA 基因沉默
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 71-75
• 页数: 5页
• 分类号: Q52
• 字数: 4340字
• 语种: 中文

摘要

目的 为研究小干扰RNA(siRNA)在移植免疫、肿瘤防治等方面的应用,构建针对大鼠T细胞4-1BB基因编码区的短发夹RNA(shRNA)表达质粒.方法 根据RNA干扰(RNAi)作用原理,设计、合成4条T细胞4-1BB基因的shRNA(shRNA441、shRNA540、shRNA621、shRNA758) DNA片段,插入质粒pGPU6,构建4个编码目的shRNA的表达质粒(p441、p540、p621、p758),酶切及测序鉴定.设对照组,利用电穿孔法在体外将目的基因片段导入BN大鼠T细胞,48 h后,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术(FCM)检测其对T细胞4-1BB基因表达的抑制作用,并筛选、确定最佳效果的干扰质粒.结果 酶切及测序证实成功构建重组干扰质粒p441、p540 、p621和p758,转染T细胞后,4-1BB相对表达量分别为(33.4±2.3)％、(53.0±2.3)％、(62.1±3.1)％、(40.9±1.5)％,对照组4-1BB相对表达量为(67.2±1.5)％.其中p441沉默效果最佳(P＜0.01).结论 siRNA具有抑制活化T细胞4-1BB基因表达的作用,干涉靶点具有选择性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钱海鑫	苏州大学附属第一医院普外科	228	836	13.0	16.0
2	周晓俊	苏州大学附属第一医院普外科	84	342	9.0	14.0
3	侍阳	徐州医学院附属医院普外科	24	78	6.0	7.0
4	殷骏	苏州大学附属第一医院普外科	38	154	7.0	10.0
5	宋庆伟	徐州医学院附属医院普外科	9	30	4.0	5.0
6	于生才	徐州医学院附属医院普外科	7	18	2.0	4.0