靶向人SIRT1基因的shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

• 作者: 勾善淼 孙仁虎 崔静 王春友 赵刚 黄敏
• 来源期刊: 中国普通外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胰腺肿瘤 SIRT1 RNA干扰 shRNA 真核表达质粒
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 259-263
• 页数: 5页
• 分类号: R735.9
• 语种: 中文

摘要

目的 构建针对人SIRT1基因的shRNA真核表达质粒,并筛选出对胰腺癌细胞系PANC-1基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体.方法 针对SIRT1基因的mRNA序列设计,分别构建3个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体,经大肠杆菌扩增,酶切,PCR,测序鉴定,转染胰腺癌PANC-1细胞,实时荧光定量PCR和Western blot检测SIRT1 mRNA和蛋白的被抑制情况.结果 经测序证实,成功构建SIRT1-shRNA真核表达质粒,插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致.重组质粒转染PANC-1细胞后,SIRT1 mRNA和蛋白水平明显下调;其中以1号重组质粒效应最强.结论 成功构建了携带以SIRT1为靶向的shRNA的重组质粒.其对胰腺癌PANC-1细胞SIRT1的表达具有显著抑制效应.该实验为进一步研究SIRT1的功能和肿瘤的基因治疗提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王春友	华中科技大学同济医学院附属协和医院胰腺外科	244	1645	18.0	28.0
2	赵刚	华中科技大学同济医学院附属协和医院胰腺外科	76	409	10.0	16.0
3	崔静	华中科技大学同济医学院附属协和医院胰腺外科	13	26	2.0	4.0
4	勾善淼	华中科技大学同济医学院附属协和医院胰腺外科	27	57	4.0	6.0
5	孙仁虎	华中科技大学同济医学院附属协和医院胰腺外科	11	28	3.0	5.0
6	黄敏	华中科技大学同济医学院附属协和医院胰腺外科	40	90	5.0	7.0