自噬基因融合蛋白重组多克隆抗体的纯化与检测

• 作者: 张佑红 徐智鹏 朱雄伟 熊瑶 翟莉莉 苏腾甲
• 来源期刊: 武汉工程大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 多克隆抗体 免疫亲和纯化 酶联免疫吸附法 蛋白印迹 聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 页码范围: 37-41
• 页数: 5页
• 分类号: R392.1
• 字数: 3782字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-2869.2013.02.008

摘要

为了提纯并鉴定自噬基因融合蛋白重组多克隆抗体,探讨其在部分组织中的免疫定位.首先合成带谷胱甘肽转移酶标签的自噬基因融合蛋白,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,然后用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测抗体浓度,最后用免疫亲和纯化方法提纯抗血清中的多克隆抗体,酶联免疫吸附法检测抗体效价,蛋白印迹检测抗体特异性及在组织中的表达情况.结果表明:制备得到自噬基因融合蛋白重组多克隆抗体经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其质量浓度为每10 μL含5 μg,用酶联免疫吸附法显示此抗体效价及特异性较高,蛋白印迹显示蛋白大小为55 kD左右.