Survivin启动子调控的hTERT基因RNAi载体的构建及其肿瘤靶向干扰作用研究

• 作者: 余红 曹洋 曾永秋 税青林 赵矫
• 来源期刊: 泸州医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: Survivin启动子 hTERT基因 RNA干扰 肿瘤靶向性
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 页码范围: 350-355
• 页数: 6页
• 分类号: R394.2|R730.59
• 字数: 4914字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2669.2013.04.010

摘要

目的：构建带有肿瘤特异性Survivin启动子、hTERT基因靶向的shRNA表达载体pYr-Survivinp-miR30-hTERT，探讨该载体的肿瘤靶向性及其RNAi作用效率，为RNAi技术在肿瘤基因治疗中的进一步优化进行有益的探索。方法：化学合成hTERT基因shRNA寡核苷酸序列，克隆至质粒pYr-CMV-Mir30-shRNA，构建重组质粒pYr-CMV-Mir30-hTERT；克隆Survivin启动子序列，取代该质粒原有的CMV启动子，构建重组质粒pYr-Survivinp-miR30-hTERT，同时构建阴性对照质粒pYr-CMV-Mir30-NC，以上质粒均进行酶切及测序鉴定。将以上载体分别转染人乳腺癌MCF-7细胞、人宫颈癌Hela细胞及293T细胞，荧光显微镜下观察细胞转染情况，并采用半定量RT-PCR、western blot 技术检测MCF-7细胞和Hela 细胞中hTERT mRNA和蛋白的表达。结果：重组质粒经酶切及测序鉴定证实均符合设计要求，构建成功；荧光检测结果表明，CMV组在三种细胞中均有荧光蛋白的表达，而Survivin组质粒仅在MCF-7细胞和Hela细胞中表达绿色荧光，转染效率均能达到70%以上，而在293T细胞中则未见荧光；RT-PCR和Western blot的结果均显示MCF-7细胞和Hela细胞的Survivin组和CMV组中hTERT mRNA和蛋白的表达均受到明显抑制（P<0.05），两组之间无明显差异（P>0.05）。结论：Survivin启动子调控的hTERT基因RNAi载体能有效抑制Survivin阳性肿瘤细胞中hTERT的表达，而对正常细胞不产生影响。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹洋	泸州医学院生理学教研室	18	94	6.0	8.0
2	税青林	泸州医学院医学生物学与遗传学教研室	60	180	8.0	10.0
3	曾永秋	泸州医学院医学生物学与遗传学教研室	26	58	4.0	5.0
4	余红	泸州医学院医学生物学与遗传学教研室	47	181	8.0	10.0
5	赵矫	泸州医学院医学生物学与遗传学教研室	31	89	5.0	8.0