突触小泡膜蛋白VAMP-2的原核表达、纯化及活性鉴定

• 作者: 房华丽 李崭 李涛 王德慧 王慧 王琴 罗森
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 囊泡相关膜蛋白质2 金属内肽酶 底物 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 250-253
• 页数: 4页
• 分类号: Q51
• 字数: 3847字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2013.04.003

摘要

目的 克隆突触小泡膜蛋白(VAMP-2)基因,原核表达、纯化并鉴定重组蛋白VAMP-2活性.方法 根据GenBank中已报道的VAMP-2基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR从小鼠的全脑组织总RNA中获得基因.将去疏水区后的基因克隆至含有N端信号肽pelB序列的原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化BL21(DE3) Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化,SDS-PAGE及Western印迹进行鉴定,并利用金属内肽酶BoNT/B轻链对该蛋白进行生物活性分析和酶活动力学测定.结果 与结论成功构建pET-22b-VAMP-2表达质粒,并转化大肠杆菌BL21(DE3)Rosetta,Western印迹证实重组蛋白VAMP-2(残基Met 1-Met 94)获得可溶性表达.重组蛋白VAMP-2可被金属内肽酶BoNT/B特异性酶解,具有良好的生物学活性.