羊口疮病毒B2L基因的原核表达、纯化及鉴定

• 作者: 代兄 仲亮 应海刚 张七斤 李智 白银荣
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 羊口疮病毒 B2L基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 102-106
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 4414字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2017.09.027

摘要

[目的]获取羊口疮病毒B2L基因编码蛋白.[方法]根据GenBank上羊口疮病毒ORFV/ShanXi/2011/China株B2L基因序列,设计并合成1对特异性引物,利用PCR方法扩增B2L全基因序列,然后将扩增的B2L基因克隆到PMD18-T载体上;对构建的重组克隆质粒(PMD18-T-B2L)经过测序鉴定后,将目的基因亚克隆到PET-32a(+)原核表达载体上,获得重组表达质粒PET-32a-B2L,然后通过双酶切和测序进行鉴定;将重组菌于37℃、终浓度含1 mM IPTG的LB培养基中,诱导表达3 h后进行SDS-PAGE分析;表达的目的蛋白经过层析纯化后,进行Western Blot鉴定.[结果]原核表达重组质粒构建成功;SDS-PAGE鉴定发现目的条带的分子量与预期大小相符;纯化的目的蛋白经Western Blot鉴定正确,表明蛋白表达成功.[结论]本研究成功构建了羊口疮病毒B2L基因原核表达重组质粒,并成功表达和纯化了B2L蛋白,为后续羊口疮病毒检测方法的建立打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张七斤	内蒙古农业大学兽医学院	45	438	11.0	19.0
2	李智	内蒙古农业大学兽医学院	14	52	5.0	6.0
3	仲亮	内蒙古农业大学兽医学院	4	17	3.0	4.0
4	白银荣	内蒙古农业大学兽医学院	1	3	1.0	1.0
5	代兄	内蒙古农业大学兽医学院	3	26	2.0	3.0
6	应海刚		1	3	1.0	1.0