CFP荧光蛋白文库构建及FRET技术筛选钙调素结合蛋白

• 作者: 关珊 刘晓进 孟凡力 李朝军
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: 钙调素 Cre-loxP 荧光共振能量转移 单细胞PCR
• 年，卷（期）: 2013,（12）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 1779-1785
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11844/cjcb.2013.12.0245

摘要

钙调素(Calmodulin,CaM)是细胞内Ca2+信号的主要受体,能够与靶蛋白相互结合调节靶蛋白的活性,在细胞增殖、分化、凋亡、迁移等过程中都起着重要作用.荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术是目前研究蛋白质相互作用比较成熟的方法之一.作者通过Cre-loxP位点特异性重组技术构建了带有CFP荧光蛋白标记的文库,与YFP-CaM共同转染HEK293细胞,应用荧光共振能量转移技术(FRET)进行检测,挑取发生FRET作用的单个细胞,并进行单细胞PCR检测.由此扩增出的片段通过测序和蛋白序列数据库NCBI进行序列比对后,筛选出与CaM产生相互作用的蛋白.目前,已经通过这种方法成功地筛选到了一些与CaM相结合的蛋白,从而为进一步研究CaM蛋白在生理环境下的作用提供有利条件.