重组蛋白HSP65-6×(IA2-P2)-His的构建、表达及分离纯化

• 作者: 刘俊 刘景晶 吴洁 徐茂磊 李泰明 林旋 金亮 韩萌萌
• 来源期刊: 安徽医药
• 关键词: 重组蛋白 发酵 纯化 鉴定
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 药学研究
• 页码范围: 732-734
• 页数: 3页
• 字数: 2705字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建HSP65-6×(IA2-P2)-His表达载体并研究其在大肠杆菌中的表达及分离纯化.方法 通过酶切酶连的方法将6×(IA2-P2)-His替换pET-28a-HSP65-6×P277中的6×P277,构建好的载体经DNA测序分析构建成功.乳糖诱导表达的蛋白经Ni+柱分离纯化.最后用SDS-PAGE及Western blot鉴定目的蛋白.结论 HSP65-6×(IA2-P2)-His最高表达量占菌体总蛋白的65%,超声破碎后蛋白以可溶性的形式存在于裂解上清中.Ni+柱纯化后蛋白纯度可达80%电泳纯以上.最后Western blot鉴定目的蛋白具有抗原性和His标签.结论 重组载体pET-28a-HSP65-6×(IA2-P2)-His成功转入BL21中,以可溶性的形式高效表达,该工作为进一步验证融合蛋白的生物学活性奠定了一定的基础.