pTWIN1-EgAgB8/3自剪切融合蛋白原核表达载体的构建及表达

• 作者: 于春洋 吾拉木·马木提 张瑞妮 法蒂玛·木特力甫
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 棘球绦虫 EgAgB8/3 pTWIN1表达载体 诱导表达纯化 western blot
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 154-158
• 页数: 5页
• 分类号: R383.13
• 字数: 4506字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2013.02.010

摘要

目的 表达获得较纯的细粒棘球绦虫AgB8/3重组抗原(rEgAgB8/3).方法 根据GeneBank登陆号(AF362442)下载目的 基因核酸序列,利用DNAman软件设计引物,对EgAgB8/3编码分泌型多肽片段的核酸序列进行PCR扩增,测序鉴定其正确性后定向连入原核表达质粒pTWIN1上,并转化至大肠杆菌ER2566,IPTG诱导表达CBD-intein1-EgAgB8/3融合蛋白后进行纯化,用SDS-PAGE电泳和western blot分析鉴定融合蛋白与目的 蛋白rEgAgB8/3的表达量和纯度.结果 成功克隆获得EgAgB8/3基因目的 片段和具有蛋白自剪切功能的重组表达载体pTWIN1-EgAgB8/3,并鉴定其表达的融合蛋白主要以可溶形式存在;构建的重组载体中融合标签的几丁质结合域(CBD)和内含肽(intein1)分别使亲和层析纯化和融合标签自剪切一步完成.结论 成功的构建重组表达载体pTWIN1-EgAgB8/3,获得高表达融合蛋白CBD-intein1-EgAgB8/3,并经简单后续处理即可获得含极少任何额外氨基酸的可溶性目的 蛋白rEgAgB8/3,尽可能保证了其原有的结构和活性,为抗rEgAgB8/3特异性单克隆抗体的快速制备奠定了基础.