定量检测肝细胞生成素Cn的双抗体夹心ELISA检测方法的建立

• 作者: 代学强 刘勇 吴昊 吴飞林 周旭 崔春萍 赛岩 车薇 高慧英
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 肝细胞生成素Cn 方阵滴定法 双抗体夹心 包被抗体 酶标抗体
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 427-430,434
• 页数: 5页
• 分类号: Q813.2
• 字数: 4705字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2013.06.009

摘要

目的 建立定量检测肝细胞生成素Cn (HPPCn)的双抗体夹心ELISA方法.方法 利用杂交瘤方法获得8个抗HPPCn单克隆抗体(mAb),并行SDS-PAGE和Western印迹对纯化抗体特性进行鉴定.利用镀金芯片法对8个抗体进行配对检测.通过方阵滴定法确定包被抗体和酶标抗体的最适工作浓度.以纯化的HPPCn抗原为标准品建立标准曲线.结果 得到了8株稳定分泌抗人HPPCn抗体的杂交瘤细胞株,分别为Ab 65-29-6,Ab_3-3-3,Ab_9-34-1,Ab_4-8-12,Ab_7-8-10,Ab_2-30-23,Ab_1 1-11-12和Ab_12-27-23.8个抗体均能够特异结合HPPCn抗原,其中Ab_65-29-6与细胞中HPPCn结合的特异性最好.经抗体配对检测证实最佳配对组合为:Ab_2-30-23和Ab_4-8-12.包被抗体Ab_2-30-23和识别抗体Ab 4-8-12的最适工作浓度为2.5 μg/ml,最适稀释度为1∶2000,标准曲线检测的线性范围为5.0～60 ng/ml.结论 制备了可特异性检测人HPPCn蛋白的单克隆抗体,并建立了一种可用于定量检测人HPPCn的双抗体夹心ELISA方法.