甘蔗cDNA-SCoT差异显示分析PCR反应体系建立、优化及应用

• 作者: 吴凯朝 吴建明 李杨瑞 杨丽涛
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 甘蔗 cDNA-SCoT 差异表达
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 生物技术与组织培养
• 页码范围: 892-898
• 页数: 7页
• 分类号: Q786|S566.1
• 字数: 4629字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2013.05.016

摘要

cDNA-SCoT差异显示分析是应用于植物基因差异表达研究的一项新技术.本研究以甘蔗品种桂糖11号根尖为材料,提取总RNA并反转录第1链cDNA,对影响甘蔗cDNA-SCoT差异显示PCR反应的cDNA模板、SCoT引物、dNTPs、Taq DNA聚合酶和Mg2+等因子进行优化,建立甘蔗cDNA-SCoT反应体系,同时应用优化后反应体系分离25％PEG6000胁迫诱导甘蔗根尖差异表达基因片段.结果表明:各项因子均对PCR扩增效果存在影响,20μL反应体系中各因子的最佳含量如下:cDNA 80 ng、引物浓度1.0 μmol/L、Taq DNA聚合酶2.0 U、dNTPs浓度200 μmo1/L、Mg2+浓度1.8 mmol/L.研究结果还显示,SCoT引物扩增多态性丰富,平均每条引物扩增条带30条,多态性条带比率为46.9％,6条引物分离得到PEG诱导甘蔗根尖特异表达片段45条,表明本研究所建立的甘蔗cDNA-SCoT反应体系具有操作简便、结果稳定、重复性好、成本低、多态性丰富等优点,可为甘蔗基因差异表达研究提供新的技术支持.