融合蛋白GGH N端延长类似物的克隆表达、纯化及活性研究

• 作者: 冯均尚 史劲松 张晓梅 窦文芳 许正宏 许泓瑜
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 融合蛋白GGH 类似物 毕赤酵母 表达 纯化 活性
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 124-129
• 语种: 中文

摘要

GGH是人胰高血糖素样肽-1与人血清白蛋白融合蛋白(GLP-1A2G)2-HSA的简称,为研究N端添加丙氨酸的修饰对其活性的影响,通过基因工程方法成功构建表达该类似物的工程菌,并纯化得到终产物,完成了初步体外活性检测.首先运用PCR技术扩增出融合蛋白GGH类似物的基因片段,以pPIC9K为表达质粒构建了重组表达质粒,将双酶切和测序验证正确的重组质粒电转至分泌型菌株毕赤酵母GS115,然后经过MD平板筛选获得转化子,利用甲醇诱导表达72 h,SDS-PAGE检测上清产物与未修饰的GGH对比,得到阳性转化子.融合蛋白经过发酵液8 000 r/min离心10 min,0.45 μm的微孔滤膜微滤,采用截留分子量为10 kD的超滤膜超滤20倍,再依次经过Blue Sepharose 6 Fast Flow、Phenyl Sepharose Fast Flow、QSepharose Fast Flow、Sephadex G-25层析柱.在RINm5f细胞上测cAMP的生成,通过与阳性对照的标准曲线对比发现,A-GGH活性比GGH提高10倍,表现出较好的体外活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许正宏	江南大学药学院制药工程研究室	241	1740	20.0	30.0
2	窦文芳	江南大学药学院制药工程研究室	55	278	10.0	13.0
3	张晓梅	江南大学药学院制药工程研究室	53	428	11.0	18.0
4	史劲松	江南大学药学院生物活性制品加工工程研究室	141	480	11.0	15.0
5	许泓瑜	江南大学药学院制药工程研究室	77	764	14.0	23.0
6	冯均尚	江南大学药学院制药工程研究室	1	1	1.0	1.0