结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3的基因克隆及生物信息学分析

• 作者: 吴江东 吴芳 姚楠 张万江 徐芳 田玺泽 章乐 董江涛
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 克隆 Hsp16.3 生物信息学
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 6-11
• 页数: 6页
• 分类号: R378
• 字数: 4461字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3原核表达载体,获得Hsp 16.3蛋白,并应用生物信息学软件,分析结核分枝杆菌小分子热休克蛋白16.3(Hsp16.3)的多种蛋白质性质,以及获取该基因的相关信息.方法 以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增Hsp 16.3基因,PET28a为载体,构建重组质粒PET28a-Hsp16.3并表达,利用Pmtparam、Protseale、HMMTOP、TMHMM、GOR4、ProtFun 等软件预测和分析结核分枝杆菌小分子热休克蛋白16.3的氨基酸组成、理论等电点、结构域、活性位点、疏水性、跨膜区、糖基化位点、磷酸化位点、二级结构及系统进化分析.结果 成功构建了Hsp16.3原核表达载体PET28a-Hsp16.3,并在宿主菌BL21(DE3)中表达.推测结核分枝杆菌小分子热休克蛋白16.3白分子式为C716H1131N197O225S4,分子量为16227.2,理论等电点为5.00.该蛋白氨基酸序列中含有α-螺旋(Alpha helix)46处,延伸链(Extended strand)25处,无规则卷曲(Random coil)73处及5个磷酸化位点；4个O-糖基化位点；1个前肽裂解预测位点.结论 Hsp16.3基因克隆入宿主菌中并成功表达；该蛋白推测是一个亲水性不稳定蛋白,无跨膜区,可能参与重要的能量代谢及免疫反应.