小鼠甲基转移酶EZH2基因慢病毒表达载体的构建及验证

• 作者: 卢韬 吕娟 孙荷 张帆 杨明峰 董学君
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 关键词: 组蛋白甲基转移酶 慢病毒载体 293T细胞 四质粒系统
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 59-62
• 页数: 4页
• 字数: 3299字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建小鼠组蛋白H3 K27三甲基转移酶EZH2基因慢病毒载体及鉴定.方法 以携带EZH2 cDNA的PCMV-SPORT6载体为模板,自行设计携带有Kpnl和Xmal酶切位点的引物PCR扩增出目的基因编码序列,扩增产物用内切酶酶切后定向克隆到慢病毒载体PLenti-eGFP-NEO中,通过PCR、酶切及测序验证载体；将重组慢病毒载体和包装质粒pRsv-REV、pMDlg-pRRE及pMD2G组成的四质粒系统,共转染293T细胞包装成慢病毒,收集含病毒颗粒的细胞上清液,浓缩和纯化后得到高效价的病毒液,转染293T细胞进行效价测定.结果 PCR扩增出约2241 bp的序列,构建的慢病毒载体测序结果与Genebank报道的目的基因序列一致；四质粒系统成功共转染入293T细胞中,在细胞中能够稳定表达,包装出了2.1×108TU/ml的病毒液.结论 成功构建了小鼠EZH2基因慢病毒载体,并得到2.1×108TU/ml高效价的病毒液.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张帆	312000 浙江省绍兴市人民医院、浙江大学绍兴医院分子医学中心	1	0	0.0	0.0