溶藻弧菌HY9901转运蛋白TolB的原核表达及条件优化和纯化

• 作者: 丁燏 吴灶和 周泽军 庞欢瑛 简纪常
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 溶藻弧菌 tolB基因 原核表达 优化 纯化
• 年，卷（期）: 2013,（11）
• 页码范围: 55-59
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|S941.42
• 字数: 4886字
• 语种: 中文

摘要

为研究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus) HY9901转运蛋白TolB作为疫苗候选抗原的可能性，根据已发表的溶藻弧菌HY9901转运蛋白TolB序列(JQ846501)，设计1对带酶切位点的引物，PCR扩增tolB基因，然后经酶切、连接等步骤，构建tolB基因的原核表达载体pET-TolB，并对其IPTG浓度、诱导时间、温度、洗脱浓度进行优化，以期获得较大量的目的蛋白。结果表明：IPTG诱导后经SDS-PAGE与Western-blot分析，成功表达了溶藻弧菌HY9901株TolB蛋白，分子量与预期相符，且表达的蛋白以包涵体的形式存在；TolB蛋白在大肠杆菌中诱导表达的优化条件为：0.2 mmol/L IPTG，37℃诱导4 h；最佳咪唑洗脱浓度为400 mmol/L。这些结果为进一步研究目的蛋白的免疫原性和疫苗制备奠定基础。