2型猪链球菌β-半乳糖苷酶基因的克隆表达及酶活性测定

• 作者: 张凤玉 潘秀珍 王长军 胡丹 郑峰 龚秀芳
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 2型猪链球菌 β-半乳糖苷酶 克隆 酶活性
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 39-44
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20140207

摘要

目的:克隆表达2型猪链球菌β-半乳糖苷酶(BgaC)编码基因,并测定其酶活性.方法:根据05ZYH33基因组序列设计引物,PCR扩增bgaC基因,构建重组表达质粒pET28a-bgaC,转化E.coli BL21,筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,产物通过SDS-PAGE鉴定;最后对表达产物进行亲和层析纯化,获得BgaC纯化蛋白后测定其酶活性.结果:bgaC基因在原核细胞中得到高效表达,重组表达的BgaC分子质量约为69kDa,其酶促反应最适温度为42C,最佳反应时间为30min,最适反应pH为5.5,最佳底物浓度为10mmol/L.2型猪链球菌BgaC的体外酶活为1615U/ml,酶比活为1076U/mg.结论:2型猪链球菌强毒力株05ZYH33中含有bgaC基因,在原核系统高效表达的BgaC具有良好的酶学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王长军		134	625	12.0	17.0
3	潘秀珍		80	452	10.0	17.0
4	郑峰		26	98	6.0	8.0
7	胡丹		22	39	3.0	5.0
8	龚秀芳		10	13	3.0	3.0
9	张凤玉		4	6	1.0	2.0