刚地弓形虫尿苷磷酸化酶的克隆、表达与免疫反应性检测

• 作者: 李润花 李雅清 殷丽天 殷国荣 王海龙 祝建疆
• 来源期刊: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 刚地弓形虫 尿苷磷酸化酶 生物信息学分析 基因克隆 原核表达 免疫反应性
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 24-28
• 分类号: R382.5
• 语种: 中文

摘要

目的 预测刚地弓形虫尿苷磷酸化酶(uridine phosphorylase,TgUPase)基因编码蛋白的主要特性和抗原表位,克隆、表达TgUPase基因,并检测其免疫反应性. 方法 采用生物信息学在线分析程序和软件预测TgU-Pase蛋白的理化性质和抗原表位.提取RH株弓形虫速殖子总RNA.根据TgUPase基因全长编码序列(GenBank登录号为DQ385446.1)的开放阅读框设计引物,并用RT-PCR扩增,扩增产物经双酶切后连接人pET-30a(+)载体.用重组质粒转化大肠埃希菌(E coli) DH5αt,阳性菌落经PCR、双酶切和测序鉴定.将重组质粒pET-30a (+)-TgUPase转化至E coli BL21(DE3),并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物,分别以抗His标签抗体和人抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白及其免疫反应性. 结果 生物信息学预测结果显示,TgUPase蛋白由303个氨基酸组成,相对分子质量(Mr)为33 042.9,为可溶性蛋白,有3个潜在的T/B细胞联合抗原表位.RT-PCR扩增产物约为921 bp.菌落PCR、双酶切以及测序结果表明,重组质粒pET-30a (+)-TgUPase构建成功.SDS-PAGE结果表明,经IPTG诱导获得约Mr 38000的可溶性重组蛋白(带His标签).Western blotting结果显示,重组蛋白能被His标签抗体和人抗弓形虫血清识别.结论 成功构建了重组质粒pET-30a(+)-TgUPase,获得刚地弓形虫重组尿苷磷酸化酶,且重组蛋白具有免疫反应性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王海龙	山西医科大学医学寄生虫学研究所	60	295	9.0	14.0
2	殷国荣	山西医科大学医学寄生虫学研究所	125	764	13.0	20.0
3	李润花	太原师范学院生物系	21	75	6.0	7.0
4	李雅清	山西医科大学医学寄生虫学研究所	5	14	2.0	3.0
5	祝建疆	山西医科大学医学寄生虫学研究所	4	13	2.0	3.0