类人胶原蛋白基因COL6A2的克隆及其在大肠杆菌中的表达

• 作者: 孙旸 徐立群 王刚 王皓 陈光 陈欢
• 来源期刊: 吉林农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 胶原蛋白 重组载体 大肠杆菌 克隆 纯化
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 页码范围: 51-55,65
• 页数: 6页
• 分类号: Q785|Q786
• 字数: 3952字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13327/j.jjlau.2014.1588

摘要

根据GenBank上查到的人胶原蛋白序列COL6A2（NM058175.2），利用Primer 5设计特异性引物，以吉林农业大学生物物理实验室构建的重组质粒pCMV-Sport6-COL6A2为模板进行目的基因的克隆，获得目的基因COL6A2，然后用双酶切的方法连接目的基因COL6A2和表达载体pET32a，将连接产物转化到大肠杆菌中构建原核表达载体pET32a-COL6A2。再将鉴定成功的重组质粒pET32a-COL6A2分别转化到大肠杆菌BL21、BL21（DE3）、BL21（BE3）plysS及Rosetta（DE3）中，采用1 mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组蛋白表达，经12％SDS-PAGE电泳分析并筛选出重组蛋白表达量最高的菌株。利用Ni Sepharose 6 Fast Flow琼脂糖树脂亲和层析柱纯化重组蛋白。结果表明：获得了大小为570 bp的COL6A2片段，经测序鉴定序列正确；成功构建了pET32a-COL6A2原核表达载体并表达出约30 kD的目的蛋白；筛选出BL21（DE3）作为高效表达菌株，其重组蛋白表达量占菌体总蛋白的23.9％；经镍离子亲和层析纯化获得了纯度＞90％的目的蛋白。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈光	吉林农业大学生命科学学院	175	1299	19.0	26.0
2	王刚	吉林农业大学生命科学学院	47	314	9.0	16.0
3	孙旸	吉林农业大学生命科学学院	52	349	11.0	16.0
4	陈欢	吉林农业大学生命科学学院	23	80	6.0	8.0
5	徐立群	吉林农业大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0
6	王皓	吉林农业大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0