四种隐孢子虫半胱氨酸蛋白酶Cryptopain-1基因的克隆和序列分析

• 作者: 刘宇轩 周鹏 杨晓娇 王向佩 王晓娟 石凯 米荣升 赵权 陈兆国 雷晓思 黄燕
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 隐孢子虫 Cryptopain-1基因 克隆 序列分析
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 页码范围: 41-48
• 页数: 8页
• 分类号: S852.723
• 字数: 4023字
• 语种: 中文

摘要

为克隆不同种隐孢子虫（Cryptosporidium spp.）的半胱氨酸蛋白酶Cryptopain-1基因，分析其核苷酸与编码氨基酸序列的变异情况，根据GenBank上公布的微小隐孢子虫（C. parvum）Cryptopain-1基因序列设计合成引物，用PCR技术从不同种隐孢子虫基因组DNA中扩增Cryptopain-1基因，并将其克隆至pZeroBack/blunt载体，阳性克隆经PCR鉴定正确后测序，与微小隐孢子虫Cryptopain-1基因进行序列同源性比对，并进行系统进化分析。结果显示，本研究成功从泰泽隐孢子虫（C. tyzzeri）、火鸡隐孢子虫（C. meleagridis）、兔隐孢子虫（C. cuniculus）基因组DNA中扩增出Cryptopain-1基因。与微小隐孢子虫Cryptopain-1基因比较，泰泽隐孢子虫、火鸡隐孢子虫、兔隐孢子虫Cryptopain-1基因核苷酸序列相似性分别为98.67%、94.53%、98.34%，演绎的氨基酸序列相似性分别为99.00%、96.51%、99.00%。研究结果为利用Cryptopain-1基因进行隐孢子虫的代谢、致病机理等研究奠定了基础。