中国旱獭(M.himalayana)GAPDH分子的部分cDNA克隆及序列分析

• 作者: 宋志韬 朱彬 朱珍妮 李安意 王宝菊 王忠东 陆蒙吉 陶元清 黄顺梅
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 喜马拉雅旱獭 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 乙型乙肝病毒 动物模型
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 63-68
• 页数: 6页
• 分类号: R512.6
• 字数: 3110字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2014.01.001

摘要

目的 对新近建立的乙肝研究动物模型喜马拉雅旱獭3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的部分cDNA序列进行了克隆和序列分析,为该模型在HBV感染研究中的应用奠定基础.方法 根据Genbank的人GAPDH cDNA的序列设计特异性引物,以提取的旱獭脾组织总RNA为模板,RT-PCR扩增旱獭GAPDHcDNA序列.纯化的PCR产物连接至T载体(pMD 18-T),然后构建重组质粒pMD18-T-mhGAPDH.对重组质粒进行PCR初筛、酶切鉴定,将阳性克隆测序.对序列进行同源性以及种系进化分析.结果 扩增的旱獭GAPDH序列为535 bp,编码序列为533 bp (nt3-535),编码177个氨基酸.获得的序列和其它类哺乳动物GAPDH的同源性均在88％以上,其中与土拨鼠GAPDH的同源性最高(99.62％),氨基酸序列同源性高达100％.构建种系进化树,分析结果提示喜马拉雅旱獭GAPDH与土拨鼠GAPDH的亲缘关系最接近.结论 成功的克隆了喜马拉雅旱獭GAPDH的部分序列.序列分析结果提示喜马拉雅旱獭GAPDH与土拨鼠GAPDH的亲缘关系最近,同源性最高.