阿达木单抗抗原结合片段在大肠杆菌中的共分泌表达和纯化

• 作者: 刘煜 吕立力 范丽君 陈春麟
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 阿达木单抗 抗原结合片段 共分泌表达 周质蛋白提取 色谱柱分离纯化 活性分析
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 204-208
• 页数: 5页
• 分类号: Q812
• 语种: 中文

摘要

构建阿达木单抗抗原结合片段(Fragment antigen binding,Fab)表达载体,使其在大肠杆菌内高效共分泌表达,周质空间中获得具有活性的目的蛋白.将带有信号肽的Fab片段重链与轻链克隆于带有双启动子的pETDuet-1载体内,BL21(DE3) Star宿主菌内利用IPTG低温诱导双基因共分泌表达,选用“渗透压冲击法”提取周质蛋白,色谱柱纯化,Western blot分析纯化结果,与纯化的人肿瘤坏死因子(TNF-α)相互作用进行活性分析.SDS-PAGE与Western blot分析在细胞周质中同时存在重链和轻链,大小与预期相符,ELISA试验显示Fab片段与TNF-α结合.结论:得到有活性的人源的阿达木单抗的Fab的可溶性表达产物,为进一步对其进行结构与功能的研究奠定了基础.