PinX1的原核表达、纯化及其与hTERT的相互作用

• 作者: 关鑫 叶棋浓 廉攀峰 张菊会 李俊杰 梅玲 王恩群 程龙 邹大阳
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 人Pin2/TRF1结合蛋白X1 原核表达 人端粒酶逆转录酶
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 42-44,48
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2532字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.01.010

摘要

目的：原核表达人Pin2/TRF1结合蛋白X1（PinX1），确定该蛋白与人端粒酶逆转录酶（hTERT）催化亚基的相互作用。方法：用PCR方法从乳腺文库中扩增PinX1基因的编码序列，克隆至pET-32a载体构建重组质粒pHis-PinX1，经双酶切鉴定后转化大肠杆菌BL21并进行诱导表达，SDS-PAGE和Western印迹检测His-PinX1的表达；用His磁珠纯化His-PinX1，在人肾胚细胞293T内检测His-PinX1与hTERT的相互作用。结果：扩增得到980 bp的PinX1基因；Western印迹检测表明，相对分子质量约57×103的His-PinX1获得表达，且纯化的His-PinX1与hTERT具有相互作用。结论：表达并纯化得到了与hTERT相互作用的His-PinX1，为深入研究PinX1的功能奠定了基础。