结核分枝杆菌Rv1886c的原核表达及其免疫生物学特性

• 作者: 单发 殷月兰 潘志明 焦新安 董慧 赵丹 连凯 陈祥 陶成武
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 结核分枝杆菌 Ag85B Th1型应答 体液免疫 早期感染
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 侵染和免疫
• 页码范围: 330-337
• 分类号: Q936
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.2014.03.010

摘要

[目的]Rv1886c基因编码的Ag85B是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)感染早期的分泌蛋白,本研究对其所诱导的免疫应答特性进行了探索.[方法]对Ag85B进行原核表达和鉴定,并通过夹心ELISA、间接ELISA及ELISPOT方法测定其诱导的细胞免疫和体液免疫应答水平.[结果]SDS-PAGE及Western blot鉴定结果表明,以包涵体形式表达的Ag85B蛋白,经变性、复性后能与结核病人的抗血清及免疫重组李斯特菌LM-Ag85B的小鼠抗血清发生特异性反应,表明His-Ag85B融合蛋白具有较好的免疫活性.将纯化的Ag85B蛋白皮下免疫C57 BL/6小鼠,夹心ELISA的测定结果表明,Ag85B蛋白免疫组诱导小鼠产生的特异性IFN-γ水平显著高于IL-4的水平(P ＜0.001),呈现Thl型细胞免疫应答趋势;以结核菌素PPD作为包被抗原,通过间接ELISA测定的血清抗体效价达到1:6400,表明Ag85B也能诱导有效的体液免疫应答.此外,以尾静脉途径初次免疫小鼠42天时,ELISPOT测定结果显示,结核分枝杆菌H37Rv诱导小鼠产生Ag85B240-259特异性的IFN-γ水平极显著高于卡介苗(BCG)免疫组(P＜0.001).[结论]Ag85B蛋白能激发小鼠产生较强的Thl型细胞免疫应答和较好的体液免疫应答;BCG单次免疫后诱导小鼠产生的Ag85B特异的细胞免疫应答水平较低.本研究为揭示结核分枝杆菌的致病机理、新型疫苗的研制和早期诊断试剂的开发奠定了基础.