五种食源性致病菌多重PCR的条件优化和检出限分析

• 作者: 唐俊妮 李键 陈丽君 陈娟
• 来源期刊: 中国食品卫生杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 多重PCR 扩增条件 优化 检出限 食源性致病菌 食品安全
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 实验技术与方法
• 页码范围: 137-141
• 分类号: R155|R155.5|TS207.4|R378
• 语种: 中文
• DOI: 10.13590/j.cjfh.2014.02.008

摘要

目的 对沙门菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157∶H7、单核增生李斯特菌和福氏志贺菌5种食源性致病菌的多重PCR反应条件进行优化并分析方法的DNA检测限.方法 根据沙门菌的invA基因、金黄色葡萄球菌的16S rDNA基因、大肠杆菌O157∶H7的eaeA基因、单核增生李斯特菌的hlyA基因和福氏志贺菌的ipaH基因设计5对特异性引物进行多重PCR,对反应条件包括镁离子浓度、引物浓度和退火温度进行优化试验,并确定该检测方法的检出限.结果 最佳反应条件为金黄色葡萄球菌、沙门菌和福氏志贺菌引物浓度为0.25μmol/L,单核增生李斯特菌引物浓度为0.4 μmol/L,大肠杆菌O157∶H7引物浓度为0.3μmol/L,Mg2浓度为2.25 mmol/L,退火温度为60℃;在此条件下金黄色葡萄球菌、肠炎沙门菌、大肠杆菌O157∶H7、单核增生李斯特菌、福氏志贺菌的多重PCR的DNA检出限分别为6.4、32、32、800和160 pg.结论 通过对5种引物的PCR条件进行优化和检出限的分析,为食品中该5种致病菌的快速检测奠定基础,对实际应用具有指导意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李键	西南民族大学生命科学与技术学院	117	464	10.0	15.0
2	唐俊妮	西南民族大学生命科学与技术学院	63	286	10.0	12.0
3	陈娟	西南民族大学生命科学与技术学院	66	401	10.0	15.0
4	陈丽君	西南民族大学生命科学与技术学院	1	12	1.0	1.0