TaqMan实时荧光RT-PCR检测猪脑心肌炎病毒方法的建立与应用

• 作者: 张强 李健 李树清 林颖峥 熊炜 王巧全 黄忠荣
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 猪脑心肌炎病毒 实时荧光PCR TaqMan探针
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 81-84
• 页数: 4页
• 分类号: S852.659.5|S858.23
• 字数: 2936字
• 语种: 中文

摘要

针对猪脑心肌炎病毒(EMCV)基因组保守区域,设计并合成了特异性引物和TaqMan探针,建立了EMCV的TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法.通过常规RT-PCR方法扩增EMCV保守序列并将其连入pMD19-T载体,制备阳性标准质粒,优化反应条件,以10倍梯度稀释的标准品绘制标准曲线,EMCV标准曲线的相关系数为0.999.结果显示,该方法检测灵敏度达到10拷贝/μL,对猪捷申病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、猪传染性胃肠炎病毒检测结果均为阴性.方法重复性好,批内和批间变异系数均小于2％.检测采集自上海供港猪场、进境美国种猪、加拿大、法国种猪的血清样本145份,EMCV核酸的检出率国内猪场53.6％,美国猪检出率为27.6％,加拿大猪检出率为20％,法国猪检出率为26.7％.EMCV实时荧光RT-PCR方法的建立为该病的快速诊断和流行病学调查提供了有效手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李健		50	270	9.0	12.0
2	李树清		46	278	10.0	13.0
3	王巧全		33	179	8.0	11.0
4	熊炜		37	146	7.0	9.0
5	黄忠荣		23	110	6.0	8.0
6	张强		22	61	5.0	5.0
7	林颖峥		13	17	3.0	3.0