全人源抗IL-21受体单链抗体的表达纯化及其亲和常数的测定

• 作者: 吴沁航 吴薛明 张芳 江曙 潘扬 王旻
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 单链抗体 白介素21受体 表达 纯化 抗体亲和力 酶联免疫吸附法
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 521-524
• 页数: 4页
• 分类号: Q81
• 语种: 中文

摘要

将从全人源噬菌体单链抗体库中经亲和筛选获得的抗白介素21受体单链抗体C2进行表达,摸索IPTG诱导表达的最佳浓度,经镍柱亲和层析分离纯化,HPLC鉴定单链抗体C2的纯度,并通过非竞争性ELISA固相法,经确定最佳抗原包板浓度、最佳抗原包板时间及最佳抗原与抗体结合反应时间,测定单链抗体C2的亲和常数.实验结果表明在0.1 mmol/L IPTG诱导下单链抗体C2可溶性表达在细胞周质,镍柱亲和层析纯化C2,纯度为92％,其最佳表达量为1.23 mg/L发酵液.采用非竞争性ELISA法,通过绘制不同浓度白介素21受体与单链抗体C2的结合反应曲线,计算出C2的亲和常数为(7.36±2.62)×108 L/mol,与IL-21R有较强的亲和力,为其进一步开发进行肿瘤靶向治疗提供理论基础.