草鱼呼肠孤病毒HZ08株S10编码蛋白多克隆抗体制备及其特性分析

• 作者: 刘春 吴淑勤 曾伟伟 李永刚 梁红茹 殷亮 王庆 王英英 石存斌
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 草鱼呼肠孤病毒 HZ08株 S10编码蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 页码范围: 449-456
• 分类号: Q785|S965.112
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2014.48945

摘要

为研究草鱼呼肠孤病毒(GCRV) HZ08株S10基因节段编码蛋白的可能功能,采用PCR方法扩增草鱼呼肠孤病毒HZ08株S10基因节段,并把该基因节段克隆至表达载体pET-32a(+),获得的重组表达载体pET-32a-S10转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE分析鉴定后,再通过变性、过Ni柱纯化、透析复性纯化获得目的蛋白.然后用纯化的重组蛋白免疫昆明小白鼠,制得多克隆抗体,用间接ELISA方法测定抗体效价,用Western blot和IFA(间接免疫荧光试验)鉴定抗体特异性.结果表明,SDS-PAGE分析表达的重组蛋白约为53 ku,大小与预期相符,目的蛋白主要存在于包涵体中;过Ni柱纯化、透析复性纯化后的重组蛋白纯度可达97.4％;间接ELISA测得制备的多克隆抗体效价约为1∶106,Western blot和IFA结果显示,制备的多克隆抗体能识别HZ08毒株,表明S10编码蛋白为GCRV-HZ08株的结构蛋白.