草鱼呼肠孤病毒HZ08株FQ-PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 刘宝芹 吴淑勤 张乐生 曾伟伟 王庆 王英英 石存斌
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 草鱼呼肠孤病毒 HZ08株 FQ-PCR 检测方法
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 页码范围: 329-335
• 分类号: S94
• 字数: 4472字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2012.00329

摘要

草鱼出血病是危害中国淡水养殖最为重要的病害之一,其病原为草鱼呼肠孤病毒(grass carp hemorrhage virus,GCRV),其中,HZ08株是当前引起草鱼出血病的主要流行毒株.为建立一种快速、灵敏、特异的草鱼呼肠孤病毒主要流行株检测方法,本研究利用草鱼呼肠孤病毒HZ08株S7基因保守区,设计了一对能特异性扩增154 bp片段的引物和TaqMan探针,用含有S7基因全长的重组质粒PAVX1-S7作为标准品,构建质粒拷贝数与CT值的标准曲线,并对该方法的特异性、可重复性、敏感度进行评价.结果显示:标准曲线在6.0×1010～6.0拷贝数之间有很好的线性关系(r=0.999)；实时荧光定量PCR最少可检测到6个阳性质粒,有较高的敏感性；试验内及试验间变异系数分别为0.82％与0.41％～ 0.52％,重复性强；对水生动物其他病毒均无扩增反应,具有很好的特异性.应用该方法对采集的32份草鱼出血病样品进行检测,其中28份为阳性,而以常规RT-PCR检测同样的样品,仅23份为阳性.本研究建立的草鱼呼肠孤病毒流行株实时荧光定量PCR检测方法在特异性、灵敏度、重复性方面具有较好的测试结果,在GCRV的快速检测和病毒初步定量中应用前景乐观.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	石存斌	中国水产科学研究院珠江水产研究所	105	1345	22.0	31.0
2	王庆	中国水产科学研究院珠江水产研究所	18	148	6.0	12.0
3	刘宝芹	中国水产科学研究院珠江水产研究所	3	92	3.0	3.0
7	曾伟伟	中国水产科学研究院珠江水产研究所	10	125	5.0	10.0
8	张乐生	中国水产科学研究院珠江水产研究所	3	92	3.0	3.0
9	王英英	中国水产科学研究院珠江水产研究所	10	58	3.0	7.0