乙型脑炎病毒NS1'蛋白编码框的扩展对病毒毒力的影响

• 作者: 于海 刘飞 单同领 梁超 童光志 童武 郑旭晨 郑浩 郭亦非
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 乙型脑炎病毒 NS1' 突变 毒力
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 页码范围: 27-31
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 3333字
• 语种: 中文

摘要

通过分析乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）基因组中核糖体移码序列，在对NS2A基因实施同义突变基础上，设计2组引物，通过PCR突变方法，依次删除移码后NS1'基因开放阅读框的终止密码子，并将突变片段替换JEV感染性克隆pJEHEN中相应片段，获得了2株突变全长克隆。经体外转录合成RNA，再以RNA转染细胞，拯救出两株突变病毒vJET1和vJET2。通过RT-PCR扩增突变病毒中含突变位点的基因组片段，测序证实了vJET1基因组3690位核苷酸存在由T向A的突变， vJET2基因组3690位和3819位核苷酸均存在由T向A的突变。将vJET1和vJET2感染Vero细胞后，Western blot检测显示，两株突变病毒表达的NS1'蛋白均出现延长现象。生长曲线显示，与亲本病毒vTHen相比，突变病毒增殖速度均出现下降。动物实验显示，与vTHen相比，vJET1和vJET2对小鼠的神经毒力与神经侵袭力也出现下降。上述结果表明，NS1'编码框的延伸降低病毒在体外培养细胞上的增值速度，也减弱了病毒对小鼠的毒力。