4个沉默鸡恒定链基因(Ii)慢病毒载体的构建及其效果比较

• 作者: 余为一 张大淦 操储云 陈芳芳
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 恒定链基因(Ii) 慢病毒重组载体 基因沉默 感染效率
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 1175-1181
• 页数: 7页
• 字数: 4376字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2014.09.015

摘要

恒定链(invariant chain,Ii)是脊椎动物重要的免疫分子,在主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅱ类分子递呈抗原中起重要作用.为研究鸡(Gus gallus)Ii与MHCⅡ类分子的关系,本研究构建了4个沉默Ii基因的慢病毒表达载体,并比较了其干扰效果.首先,用自行设计合成的4条鸡Ii基因干扰序列,分别经一步退火法获得双链短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA),并将其用双酶切法插入慢病毒载体pLL3.7.4个构建的慢病毒重组载体经酶切和测序鉴定,分别命名为pLL-Ii-shRNA236、pLL-Ii-shRNA376、pLL-Ii-shRNA527和pLL-Ii-shRNA539.然后把这些重组载体分别转染293T细胞(转染腺病毒E1A基因(lethal infection gene)的人肾上皮细胞系),进行病毒包装,再用包装的慢病毒感染鸡源巨噬细胞HD-11.结果表明,重组载体感染的293T细胞表达绿色荧光蛋白,用包装的慢病毒接种293T细胞,其滴度达2.2× 107～5.1×107 TU/mL;接种HD-11细胞的感染率均达到95％以上.最后用荧光定量PCR方法检测其沉默鸡源巨噬细胞HD-11的鸡Ii mRNA的效率,与对照组相比,4个重组慢病毒干扰效率分别为37％、52％、88％和78％;其中,pLL-Ii-shRNA527的干扰效率最高.综上所述,本研究从4个构建的重组载体中筛选出1个高效沉默鸡巨噬细胞Ii基因重组载体,并提示shRNA序列是决定沉默特定基因的关键.实验结果为研究鸡Ii在递呈抗原中与其他免疫分子的关系提供了基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余为一	安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室	121	1025	17.0	25.0
2	陈芳芳	安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室	26	108	6.0	9.0
3	操储云	安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室	1	2	1.0	1.0
4	张大淦	安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室	1	2	1.0	1.0