绵羊激活素受体 IIB（ActRIIB）基因的克隆、序列分析及原核表达

• 作者: 刘明军 安静 张宁 张雪梅
• 来源期刊: 农业科学与技术（英文版）
• 关键词: 绵羊 激活素受体 IIB基因 序列分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 分子生物学?组织培养
• 页码范围: 1644-1648
• 页数: 5页
• 字数: 864字
• 语种: 英文

摘要

[目的]旨在克隆绵羊激活素受体 IIB （ActRIIB）基因，并构建原核表达载体进行体外表达，为进一步验证功能奠定基础。[方法]以绵羊肝脏组织为材料，以提取总 RNA反转录得到的 cDNA为模板，利用同源序列克隆技术，对绵羊 ActRIIB基因的 cDNA全长进行克隆，并对其进行生物信息学分析。再根据克隆序列设计引物，将其与原核表达载体 pET41a连接，构建重组表达质粒 pET41a-ActRIIB，经IPTG诱导后进行表达鉴定。[结果]扩增获得绵羊ActRIIB基因cDNA全长1564 bp（ Genbank登陆号为：JX422071.1），最大开放阅读框为1539 bp，共编码512个氨基酸；其氨基酸序列与牛的同源性最高（99.6%），ActRIIB的 C末端区域高度同源且属于 TGFβ家族。原核诱导表达获得符合预期大小（约92 kD）并带有组氨酸标签序列的 ActRIIB重组蛋白。[结论]绵羊 ActRIIB基因的克隆和表达为进一步研究其生物学功能奠定了基础。