丹参转录因子SmWRKY1蛋白的表达和纯化条件优化研究

• 作者: 刘玉忠 吴志刚 吴文燕 李瑞博 申业 荣齐仙 陈敏
• 来源期刊: 中国中药杂志
• 关键词: 丹参 SmWRKY1 优化表达 包涵体蛋白 蛋白质印迹
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 资源与鉴定
• 页码范围: 1214-1219
• 语种: 中文
• DOI: 10.4268/cjcmm20140713

摘要

WRKY转录因子是一类含有高度保守的WRKY结构域的锌指蛋白,是植物所特有的转录因子家族.该研究将已克隆的SmWRKY1 cDNA构建到原核表达载体pET28a上,转化大肠杆菌BL21 (DE3)进行诱导表达,SDS-PAGE结果显示该蛋白的大小约36 kDa,与预测的蛋白相对分子质量一样,说明该基因在大肠杆菌中成功表达.对影响蛋白表达的4个因素:诱导时间、诱导温度、IPTG浓度及诱导前菌液的浓度进行优化,结果表明在大肠杆菌BL21(DE3)中,当A600达到约1.0 ～1.5时,加入0.2 mol·L-1的IPTG,在20℃诱导培养12h后SmWRKY1蛋白的表达量较高.原核表达产物SmWRKY1蛋白以包涵体的形式存在,采用尿素提取包涵体蛋白,用Ni2+亲和色谱法纯化表达蛋白,纯化后蛋白的质量浓度为2.454 g·L-1.经蛋白质印迹检测,His-Tag单克隆抗体可以特异性的识别SmWRKY1蛋白,进一步证实丹参SmWRKY1蛋白在大肠杆菌中成功表达.本研究为进一步开展SmWRKYI基因的表达与丹参酮类等化合物的生物合成相关研究奠定了工作基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈敏	中国中医科学院中药资源中心	52	616	15.0	22.0
2	吴志刚	中国中医科学院中药资源中心	30	518	13.0	22.0
3	吴文燕	中国中医科学院中药资源中心	2	5	2.0	2.0
4	申业	中国中医科学院中药资源中心	13	66	5.0	7.0
5	荣齐仙	中国中医科学院中药资源中心	2	15	2.0	2.0
6	刘玉忠	中国中医科学院中药资源中心	2	15	2.0	2.0
7	李瑞博	中国中医科学院中药资源中心	1	3	1.0	1.0