人骨形态发生蛋白2真核表达载体构建及其基因/

• 作者: 刘长虹 吴颖 张迪 李世轶 杨晓喻 杨涛
• 来源期刊: 华西口腔医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人骨形态发生蛋白2 真核表达载体 壳聚糖 纳米复合体
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 专栏论著
• 页码范围: 493-497
• 页数: 5页
• 分类号: R783.4
• 字数: 4096字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7518/hxkq.2014.05.016

摘要

目的：构建人骨形态发生蛋白（BMP）2的真核表达型载体，并利用其与壳聚糖制备纳米复合体。方法体外利用双酶切法将pMD18T-hBMP2-His质粒与pIRES2-EGFP真核表达载体连接，构建pIRES2-EGFP-hBMP2-His真核表达载体；采用5种不同相对分子质量及脱乙酰度的壳聚糖，通过去溶剂法在不同N/P比（壳聚糖中的胺基含量与质粒中磷酸基含量的摩尔比）情况下制备壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His纳米复合体。ZetaPALS电位及粒度分析仪检测纳米复合体的粒径大小、分布及Zeta电位，琼脂糖凝胶电泳分析及荧光分光法评定壳聚糖对pIRES2-EGFP-hBMP2-His纳米复合体的包裹情况，原子力显微镜观察粒径形貌。结果1）成功构建pIRES2-EGFP-hBMP2-His真核表达载体，并经酶切、测序证实；2）成功制备壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His纳米复合体，壳聚糖对pIRES2-EGFP-hBMP2-His质粒具有包裹作用；3）制备的壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His复合体呈球状，粒径为111.7~3214.2nm，Zeta电位为4.93~16.79mV。结论壳聚糖可与pIRES2-EGFP-hBMP2-His复合形成纳米微粒。