牛病毒性腹泻病毒SYBR Green Ⅰ实时定量RT-PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 唐思静 钟发刚 韩猛立 黄新
• 来源期刊: 新疆农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 牛病毒性腹泻病毒 实时荧光定量RT-PCR SYBR Green Ⅰ
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 页码范围: 333-339
• 页数: 7页
• 分类号: S852.6
• 字数: 4142字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6048/j.issn.1001-4330.2014.02.020

摘要

[目的]在建立一种快速定量的用于检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的实时荧光定量RT-PCR检测方法.[方法]根据GenBank公布的BVDV 5′端非编码区(5′ UTR)核苷酸序列,软件分析后设计特异性扩增引物,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法.[结果]建立的方法只能检测到BVDV,而与猪瘟病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛轮状病毒及牛冠状病毒没有交叉反应,具有高度的特异性;在102～108copies/μL模板范围内具有良好的线性关系,所制作的标准曲线相关系数为0.998,最低可检测下限可达到102 copies/μL,具有灵敏度高的特点;不同情况下3次重复实验,变异系数均小于1.5％,具有重复性好的特点.[结果]成功建立了一种用于检测BVDV的实时荧光定量RT-PCR技术,并可用于临床样品的检测,适用于BVDV的快速诊断和流行病学调查.