聚乙二醇/(NH4)2SO4双水相体系分离纯化α-磷酸甘油氧化酶

• 作者: 万莉 刘双凤 唐昆 孟尧 张庆莲 杨敏 金家贵
• 来源期刊: 生物医学工程学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: α-磷酸甘油氧化酶 铅黄肠球菌 双水相萃取 分配系数 纯化倍数
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 136-141
• 页数: 6页
• 分类号: Q55
• 语种: 中文
• DOI: 10.7507/1001-5515.20140027

摘要

铅黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus)在诱导剂甘油存在的条件下,经发酵培养可合成和分泌α-磷酸甘油氧化酶.该菌的无细胞抽提液可通过聚乙二醇(PEG)/(NH4)2SO4双水相萃取法有效进行α-磷酸甘油氧化酶的分离和纯化.研究结果表明,PEG分子大小、PEG浓度、pH、(NH4)2SO4浓度和无机盐及粗酶液的加入量是影响该萃取系统的主要因素,最终确定的最适双水相系统为16.5％ (m/m) PEG2000、13.2％ (m/m) (NH4)2SO4、pH7.5和30％(m/m)的粗酶加入量.无机盐NaCl的加入对萃取α-磷酸甘油氧化酶会产生负面影响,导致低的纯化倍数和活性回收率.此双水相萃取体系用于放大提取α-磷酸甘油氧化酶,其酶活性回收率可达89％、分配率为1.2、纯化倍数为7.0.