RBM3重组慢病毒载体的构建、包装和鉴定

• 作者: 李俭 李士泽 李玉恒 李鹏 杨焕民 杨玉英 计红 郭丽 郭景茹
• 来源期刊: 应用与环境生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 冷休克蛋白 RNA结合基序蛋白3 慢病毒载体 Western blot
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 590-596
• 页数: 7页
• 分类号: Q494|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1145.2012.12015

摘要

构建含有冷休克蛋白RNA结合基序蛋白3(RBM3)基因的慢病毒表达载体,产毒感染ST细胞,以评价重组慢病毒载体提高RBM3蛋白表达的效果.应用分子生物学技术提取仔猪脾脏组织的总RNA,通过反转录方法扩增RBM3基因,将其连入慢病毒载体Plenti6/v5-DEST中,在感受态细胞DH5ct中扩增培养,并进行RBM3基因的测序鉴定,将重组的慢病毒质粒转染293T细胞,收获病毒液,感染293T细胞并提取细胞RNA,用逆转录PCR方法检测RBM3 mRNA在感染病毒的293T细胞中的表达,用含有慢病毒空载体pLenti6/V5-DEST的病毒液、含有重组慢病毒载体pLenti6/V5-RBM3的病毒液和无菌去离子水分别感染ST细胞后通过Western blot方法检测RBM3蛋白在感染病毒的ST细胞中的表达.结果表明:构建的慢病毒载体Plenti6/v5-RBM3经测序分析证实基因序列正确.包装后的慢病毒滴度为107 PFU/mL.逆转录PCR方法检测到感染病毒的293T细胞中,RBM3基因在转录水平上有表达,Western blot方法检测到感染病毒的ST细胞中,空载体组与空白对照组相比,RBM3蛋白表达量接近相同(分别为0.312±0.022和0.282±0.028);过表达组与空白对照组相比,RBM3蛋白表达量(0.568±0.045)显著增加(P＜0.05),RBM3蛋白在翻译水平有表达.因此,本研究构建的携带RBM3基因的重组慢病毒能够感染ST细胞,并使其RBM3蛋白表达量增加.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨玉英		45	275	8.0	15.0
2	杨焕民		194	1084	14.0	23.0
3	李鹏		70	303	8.0	15.0
4	李士泽		108	631	14.0	22.0
5	计红		74	330	11.0	15.0
6	李玉恒		6	13	2.0	3.0
7	郭丽		32	62	5.0	6.0
8	郭景茹		46	90	5.0	7.0
9	李俭		5	2	1.0	1.0