家兔γ干扰素基因的原核表达及其表达产物的单克隆抗体的制备

• 作者: 姜平 宋艳华 彭伟 王芳 胡波 范志宇 魏后军
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 家兔 γ干扰素 原核表达 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 页码范围: 939-943
• 页数: 5页
• 分类号: S858.291
• 语种: 中文

摘要

将PCR扩增的家兔γ干扰素基因克隆至pET-28a(+)原核表达载体上,构建重组载体pET-28a(+-)-IFN-γ.重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导、HisTrap亲和柱纯化,获得IFN-γ重组蛋白.以IFN-γ重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞技术获得4株抗IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别被命名为3H8、4G4、4F10、6C12,它们的亚型分别为IgG1、κc链,IgG2b、κc链,IgG1、κ链,IgG1、κc链.分别制备单克隆抗体腹水,结果,4株单克隆抗体腹水的间接ELISA效价在10-4～10-5之间.本试验通过制备抗家兔IFN-γ单克隆抗体,为研究和检测IFN-γ提供了一种重要的工具.