鹅细小病毒NS1蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

• 作者: 孙敏华 张建峰 李林林 胡奇林 董嘉文 袁建丰 邝瑞欢
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鹅细小病毒 NS1蛋白 ELISA
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: S858.332.659.2
• 字数: 3044字
• 语种: 中文

摘要

本研究克隆了鹅细小病毒（Goose parvovirus，GPV）佛山株（Foshan-2009）的NS1基因，并将其克隆至原核表达载体pET32a（+），构建重组质粒pET32a-NS1。经转化，IPTG诱导表达及SDS-PAGE和Western blot分析表明，NS1蛋白得到了表达，并且能与抗GPV的番鸭血清发生特异性反应。通过棋盘法确定NS1蛋白包被量为0.5μg/孔，待检血清1：50稀释，HRP标记的兔抗鸭二抗1：10000倍稀释时ELISA反应条件最佳，并确定阴阳性临界值为0.399。该ELISA方法特异性强，与番鸭细小病毒、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、新城疫病毒和鸭疫里默氏杆菌的阳性血清均无交叉反应；重复性好，批内和批间重复试验的变异系数分别小于5%和10%；检出率高，GPV阳性番鸭血清的检出率为92%。本研究所建立的间接ELISA方法为鹅细小病毒的血清学诊断和流行病学监测奠定了基础。