Tet-off诱导表达Egr-1 HEK293稳定细胞株的建立和鉴定

• 作者: 孟凡力 彭琬昕 金洁 龚爱华
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: Tet-off调控系统 早期生长反应蛋白1 稳定细胞株 多西环素
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 118-121
• 页数: 4页
• 分类号: R329.28
• 字数: 2602字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y140046

摘要

目的:利用大肠埃希菌Tet-off诱导表达调控系统构建多西环素调控的稳定细胞株.方法:以pEGFPEgr-1质粒为模板,扩增含早期生长反应蛋白(early growth response-1,Egr-1)完整开放阅读框的DNA序列,经酶切后插入含四环素反应元件(tetracycline responsive element,TRE)序列的表达载体pTRE2hyg,获得重组质粒pTRE2hyg-Egr-1,将其转染293Tet-off细胞株,并用G418和多西环素筛选稳定表达Egr-1的细胞株.蛋白质印迹法检测多西环素诱导表达Egr-1情况;流式细胞术检测细胞增殖能力.结果:蛋白质印迹结果显示,外源性Egr-1蛋白表达受细胞培养液中多西环素调控,当从细胞培养液中去除多西环素后,Egr-1表达量明显升高.流式细胞检测结果显示Egr-1高表达细胞的增殖能力明显高于Egr-1低表达细胞.结论:利用Tet-off体系成功构建Egr-1诱导表达的细胞株,细胞的增殖能力受Egr-1表达水平的影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	龚爱华	江苏大学基础医学与医学技术学院生物学系	77	261	10.0	13.0
2	金洁	江苏大学基础医学与医学技术学院生物学系	34	128	6.0	9.0
3	彭琬昕	江苏大学基础医学与医学技术学院生物学系	12	4	1.0	1.0
5	孟凡力	南京师范大学生命科学院	2	7	1.0	2.0