实时荧光定量PCR检测皱纹盘鲍Δ5脂肪酸去饱和酶基因表达方法的建立及应用

• 作者: 何艮 张文兵 徐玮 李明珠 艾庆辉 麦康森
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 脂肪酸去饱和酶 鲍鱼 实时荧光定量PCR 基因表达
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 页码范围: 328-334
• 页数: 7页
• 分类号: Q-33|S966.1
• 字数: 5493字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7541/2014.47

摘要

研究以皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)体内存在的2条Δ5 Fad (Hdhfad1和Hdhfad2)为目的基因,β-肌动蛋白(β-actin)和核糖体蛋白S9(Ribosomal protein S9, RPS9)为内参基因,应用2-ΔΔCt方法建立了实时荧光定量PCR (Real-Time quantitative PCR, RT-qPCR)检测体系,并应用此体系分析了鲍鱼肌肉组织Δ5 Fad在不同饲料处理下的表达差异。实验饲料含有不同的脂肪源,分别是棕榈酸甘油酯(Tripalmitin, TP 饲料)、富含二十碳四烯酸(Arachidonic acid, ARA)的油脂(AO饲料)和富含二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid, EPA)的油脂(EO 饲料)。结果表明：针对 Hdhfad1、Hdhfad2、β-actin 和 RPS9所设计的引物特异性强。各引物对的PCR 扩增效率(Efficiency, E)分别为1.05、0.99、0.97和0.98,满足2-ΔΔCt方法对 E 的要求。当退火温度为52℃,反应体积为25μL时, RT-qPCR的扩增效果最好。所建立的体系能够准确定量Δ5 Fad的基因表达。利用该方法分析Δ5 Fad在不同饲料处理下的表达结果显示,与TP对照组相比, EO和AO饲料显著降低了鲍鱼肌肉组织Δ5 Fad(Hdhfad1和Hdhfad2)的表达量。