高GC含量DNA序列PCR扩增的引物设计

• 作者: 刘树人 张凌峰 李强 高梅
• 来源期刊: 华南国防医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 聚合酶链反应 高GC含量 引物设计
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 633-638
• 页数: 6页
• 分类号: R34
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-2595.2014.07.005

摘要

目的 建立一种高GC含量DNA序列PCR扩增的引物设计方法.方法 共设计了15对高GC含量(66.0％～84.0％)DNA序列PCR扩增引物,引物Tm值均≥79.7℃,引物Tm差值(△Tm)均≤1℃.对本研究所设计引物及相关参考文献中部分引物的参数进行统计学分析.另外,基于本研究方法,设计了26对引物,以验证该方法在非高GC含量(35.2％～53.5％)DNA序列PCR扩增中的实用性.结果 采用本研究方法,所有15对高GC含量DNA序列均成功扩增;统计结果显示,Tm值和△Tm是影响高GC含量DNA序列扩增的主要因素.结论 设计具有较高Tm值和较低△Tm的引物可有效的解决高GC含量DNA序列的PCR扩增问题.另外,在较高的退火温度下,引物或DNA序列的二级结构无法形成.