富含GC DNA PCR扩增条件的优化

• 作者: 于秀琴 刘传暄 张部昌 赵志虎 马清钧
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 组合生物合成 聚合酶链反应 增强剂 富含GC DNA
• 年，卷（期）: 2002,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 257-261
• 页数: 5页
• 分类号: Q789
• 字数: 3214字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2002.04.005

摘要

目的:探索富含GC DNA的PCR扩增条件,为大环内酯类化合物组合生物合成中模块和酶域的任意组合奠定基础.方法:在PCR扩增体系中,添加甲酰胺、甘油、二甲亚砜(DMSO)、Mg2+等增强剂,并选择合适的扩增体系,优化富含GC DNA PCR扩增条件.结果:甲酰胺对富含GC DNA PCR扩增没有影响,而甘油和DMSO均可提高富含GC DNA PCR产物的特异性和产率,以5%～10%DMSO效果最好.使用Roche 长片段DNA扩增系统,在使用缓冲液2反应体系中添加10% DMSO和提高0.25mmol/L Mg2+浓度时,可以扩增长度为5kb、GC含量为73%的DNA片段.结论:应用优化的PCR扩增条件,可以扩增长达5kb富含GC的DNA片段,可以满足大环内酯类组合生物合成模块和酶域随意组合的需求.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘传暄	军事医学科学院生物工程研究所	33	231	10.0	14.0
2	马清钧	军事医学科学院生物工程研究所	147	1208	18.0	29.0
3	张部昌	军事医学科学院生物工程研究所	82	550	12.0	20.0
7	赵志虎	军事医学科学院生物工程研究所	48	447	11.0	20.0
8	于秀琴	军事医学科学院生物工程研究所	8	102	4.0	8.0