人Orai1基因真核表达载体的构建及在足细胞中的表达

• 作者: 刘健胜 卢思广 苗莉 魏冬月
• 来源期刊: 临床肾脏病杂志
• 关键词: 足细胞 基因 真核表达
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 369-373
• 页数: 5页
• 字数: 4861字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-2390.2014.06.010

摘要

目的 构建重组人Orai1基因真核表达载体,观察其在小鼠肾小球足细胞株(MPC5)中的表达.方法 根据GcnBank数据库检索到的人Orai1基因序列,人工合成法合成Orai1基因编码区(coding scqucnce,CDS)全长序列,克隆至质粒表达载体PG-CMV-IRES-EGFP,构建重组质粒载体PG-CMV-Orai1,通过PCR、双酶切及基因测序等方法进行鉴定;以脂质体转染法将重组质粒转染至MPC5细胞,应用荧光显微镜观察绿色荧光检测转染效率,RT-PCR、Wcstcrn blot法分别检测Orai1 基因的转录与翻译.结果 PCR扩增的片段长度为906 bp,双酶切出现两条带,其中约906 bp处可见目的条带.核酸测序结果与GcnBank中所报道的人Orai1基因的CDS序列完全一致.转染后48h置荧光显微镜下观察,85％以上的足细胞中可见绿色荧光.RT-PCR及Wcstcrn blot实验结果分别显示转染后的MPC5细胞在mRNA与蛋白水平表达Orai1均有所增强.结论 成功构建了重组人Orai1基因真核表达载体PG-CMV-Orai1,并建立了过表达Orail基因的肾小球足细胞模型,为深入研究钙库操纵的Ca2+通道与足细胞病之间的关系奠定了良好的实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢思广	徐州医学院附属连云港医院儿科	57	303	9.0	14.0
2	魏冬月	徐州医学院附属连云港医院儿科	2	0	0.0	0.0
3	刘健胜	徐州医学院附属连云港医院儿科	6	14	2.0	3.0
4	苗莉	徐州医学院附属连云港医院儿科	3	6	2.0	2.0