旋毛虫醛缩酶基因的克隆表达及重组蛋白酶比活性的分析

• 作者: 严若峰 孙悦 宋小凯 张振超 张旭亮 徐立新 李祥瑞 李鹏飞 苏苗苗
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 旋毛虫 醛缩酶 基因克隆 酶比活性
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 页码范围: 497-502
• 页数: 6页
• 分类号: S852.731
• 语种: 中文

摘要

根据旋毛虫醛缩酶(aldolase,ALD)基因序列设计1对特异性引物,以肌幼虫总RNA为模板,通过RT-PCR扩增肌幼虫的ALD基因.将该基因克隆到pMD18-T载体后进行序列测定和分析,再将该基因亚克隆到pET-32a(+)载体中,测序验证后转化大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导后用SDS-PAGE进行分析.结果显示,该基因与GenBank中旋毛虫醛缩酶基因的相似性高达99％.该基因在大肠杆菌中获得了表达,表达的融合蛋白大小约为57 ku,重组蛋白在菌体上清和沉淀中均有存在.Western-blot分析显示,重组蛋白可被人工感染旋毛虫的大鼠血清所识别.通过3-磷酸甘油醛脱氢酶偶联法测定该重组酶的比活性,发现该重组蛋白的最佳反应温度和pH值分别为35℃和7.0.结果表明,该重组蛋白具有一定的抗原性和酶比活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李祥瑞		126	1418	20.0	33.0
2	徐立新		57	304	11.0	14.0
3	严若峰		53	256	10.0	13.0
4	张振超		7	150	4.0	7.0
5	李鹏飞		11	68	4.0	8.0
6	宋小凯		32	84	6.0	8.0
7	张旭亮		1	0	0.0	0.0
8	苏苗苗		1	0	0.0	0.0
9	孙悦		1	0	0.0	0.0