鹿结核病流行株融合基因Rv3872-Rv3874-Rv3875的原核表达

• 作者: 刘东旭 宋纪伟 张云 时坤 曾范利 李健明 杜锐 王文玉 郝俊伟
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 鹿结核病 融合基因 原核表达 反应原性
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 页码范围: 515-520
• 页数: 6页
• 分类号: S852.618
• 语种: 中文

摘要

以本实验室保存的鹿体内分离并鉴定的结核病流行株为模板,利用重叠延伸剪接技术设计融合基因的引物,扩增融合基因Rv3872-Rv3874-Rv3875,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Rv3872-Rv3874-Rv3875;重组表达质粒被转化入大肠杆菌BL21(DE3)后,IPTG诱导表达,并采用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析方法对目的蛋白进行纯化.基因测序结果显示,融合基因Rv3872-Rv3874-Rv3875的序列与GenBank中序列的符合率为99.89％.SDS-PAGE分析显示,融合基因在大肠杆菌中成功被诱导表达,获得以可溶形式表达的融合蛋白,该蛋白的分子质量约为60 ku.Western-blot鉴定结果显示,纯化好的融合蛋白能与鹿结核病的阳性血清发生反应,说明该融合蛋白具有良好的反应原性,这一结果为它在鹿结核病血清学诊断中的应用奠定了试验基础.