利用Gateway克隆技术构建人Hiwi腺病毒载体

• 作者: 刘子玲 刘蒙蒙 姜艳芳 董晓燕 马宁
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: Hiwi基因 腺病毒 重叠延伸聚合酶链反应 Gateway克隆技术
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 方法学
• 页码范围: 898-903
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4216字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20140443

摘要

目的：获得人的全长 Hiwi编码区基因，构建携带绿色荧光蛋白（GFP）的人 Hiwi腺病毒载体，为进一步研究 Hiwi诱导白血病干细胞分化和凋亡的作用和机制奠定基础。方法：运用重叠延伸 PCR方法扩增Hiwi编码区基因全长；利用 Gateway克隆技术将 Hiwi编码区基因全长插入带有 GFP的载体 Flag-IRES-hrGFP中构建成为 pDown-Hiwi-3× flag-IRES-hrGFP，再将克隆载体 pDown-Hiwi-3× flag-IRES-hrGFP 与表达载体pAV.Des1d进行同源重组反应，得到重组腺病毒载体 pAV.Ex1d-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP。经 PCR筛选阳性克隆提取重组腺病毒质粒，包装成重组Ad-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP腺病毒。结果：人 Hiwi全长编码区基因克隆成功，经酶切及基因测序鉴定证实重组 Ad-Hiwi-3× flag-IRES-hrGFP 腺病毒质粒构建成功。采用Lipofectamine法将 Ad-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP转染入 HEK293A细胞中，在荧光显微镜下，可以观察到转染细胞中的绿色荧光。结论：成功构建重组 Ad-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP腺病毒质粒，其可在 HEK293A细胞内表达。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马宁	吉林大学第一医院血液肿瘤科	115	682	13.0	21.0
5	姜艳芳	吉林大学第一医院二部中心研究室	59	187	6.0	10.0
6	刘蒙蒙	吉林大学第一医院血液肿瘤科	9	50	4.0	7.0
7	刘子玲	吉林大学第一医院血液肿瘤科	49	209	9.0	12.0
8	董晓燕	河南省人民医院血液病研究所	5	4	1.0	2.0